谷胱甘肽循环和去甲基代谢物的生物分析 |
奥希替尼是一种“第三代”口服不可逆酪氨酸激酶抑制剂。它用于治疗非小细胞肺癌，并保留了野生型EGFR。由于其反应性，除氧化途径外，奥希替尼还通过GSH偶联和这些结合物的进一步代谢而代谢。奥希替尼的非氧化代谢程度尚不清楚，尚未有量化这种代谢途径的方法的报道。为了深入了解这种代谢途径，开发了一种敏感的生物分析测定法用于奥希替尼，活性去甲基代谢产物AZ5104和硫代代谢物奥希替尼的谷胱甘肽，半胱氨酰甘氨酸和半胱氨酸结合物。这些代谢物的容易合成是该测定法发展的关键部分。这是通过简单的一步合成和随后的LC纯化完成的。通过NMR和高分辨率质谱对化合物进行表征。样品制备是通过简单的乙腈蛋白质裂解而完成的，其中乙腈含有稳定的同位素标记的奥希替尼和硫代代谢物内标，溶剂的部分蒸发以及在洗脱液中的重构，然后进行UHPLC-MS/MS定量。除谷胱甘肽代谢物外，LLOQ设置为6 nM外，所有化合物均在2–2000 nM的校准范围内成功验证了该测定法。对于奥希替尼，AZ5104和谷胱甘肽代谢物，观察到有限的稳定性。每天一次用80毫克奥希替尼治疗的患者样品中证明了该测定法的临床适用性，奥希替尼是“第三代”酪氨酸激酶抑制剂，其靶向致敏突变型表皮生长因子受体和TKI耐药突变型T790 M非小细胞肺癌。它是一种口服的，不可逆的选择性抑制剂，可保留野生型EGFR 。当在靶蛋白中处于有利位置时，奥希替尼与EGFRm的ATP结合口袋内的半胱氨酸797残基共价结合，并不可逆地抑制靶标。奥希替尼的两种循环代谢产物是活性的去甲基代谢产物，其早期编码为AZ5104和AZ7550，约占总奥希替尼相关物质的10％。奥希替尼的反应性让位于新陈代谢途径，而对于大多数治疗药物而言，很少发挥作用。一些专家先前曾描述过osimertinib与谷胱甘肽的偶联以及随后的下游代谢为其他小分子硫醇偶联物的研究，他们提出GSH偶联物是化学形成的，而不是由谷胱甘肽S-转移酶催化的，但是程度尚未量化。药神网报道了三种不同的TKI，从肝细胞温育预测的清除率与全身清除率之间存在相关性。体内和体外不匹配然而，发现清除，最有可能是由肝外结合谷胱甘肽引起的，这种途径在所研究的肝细胞系统中不太明显。在这种新陈代谢途径中缺乏定量洞察力，可能会导致肝细胞和细胞色素P450研究高估氧化代谢的作用。GSH偶联物通过γ-谷氨酰转移酶快速代谢为半胱氨酸-甘氨酸偶联物，然后通过二肽酶进一步代谢为半胱氨酸偶联物。通过尿液或排泄物排泄之前的最后一步是将半胱氨酸残基乙酰化以形成巯基。虽然早期测定刊登于osimertinib在人和大鼠血浆，到目前为止，尚未针对AZ7550或任何奥希替尼SMT进行开发。osimertinib的反应性使得osimertinib-GHS，osimertinib-CGS和osimertinib-CYS的合成相对简单。关注印度仿制药的药神网以前已经将这种方法用于依鲁替尼。在这项研究中，药神网描述了三种OSMT的合成，以及对人血浆中的奥希替尼，AZ5104，OGSH，OCGS和OCYS进行简单，灵敏和特异的测定方法的开发和验证，以及AZ7550的半定量测定。通过分析用奥希替尼治疗的NSCLC患者的血浆样品证明了开发的测定方法的临床适用性。
奥希替尼的硫醚代谢物已成功合成和表征。所有合成的化合物均具有与指定结构一致的NMR光谱和质谱。HRMS数据几乎与计算的理论m/z相同。已开发出LC-ESI-MS/MS方法，并已用于定量测定人血浆中的奥希替尼，AZ5104，OGSH，OCGS和OCYS。所使用的方法已成功验证了T790 EFGR突变形式的NSCLC患者样品中的奥希替尼和几种代谢物的分析，并且是首次发表的针对这些药物代谢物的经过验证的测定方法。准确度和精度达到了国际准则中所述的极限，除了OGSH以外，灵敏度略低，LLOQ设置为6 nM。样品的长期，台式，冻融和自动进样器稳定性也符合要求的标准，但OGSH除外，OGSH在血浆中转化为OCGS。在分析人血浆中的奥希替尼时，所有样品均在有效范围内。 |
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| 老挝药房隶属于老挝元素制药厂，是老挝合法合规的药瓶流通企业，主要针对欧美最新的靶向药进行销售，相对原研药的相对低廉效果与同样的药品功效，为国内患者提供自救之路，原研药如卡马替尼由于高昂的研发成本与药价天价，普通家庭的患者无法承受。老挝是专利豁免国家，能够生产专利保护期内的仿制药，位于磨丁特区的老挝元素制药为中国普通家庭患者提供自救途径。 |
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