由于侵袭性胰腺癌的发病率增加，高死亡率影响全世界的男性和女性人口，且发病率相等。尽管在综合疗法方面取得了积极的成果，但5年生存率仍然很低。胰腺癌细胞在细胞周期机制中发生广泛的失调。特别是，由于大多数胰腺癌细胞的突变改变而导致的K-Ras异常诱导与活性PI3K/AKT/mTOR信号轴相关，从而导致细胞周期蛋白D-CDK4/6表达谱受损。细胞生长和代谢通过PI3K/AKT/mTOR途径进行协调，PI3K/AKT/mTOR途径充当营养和生长因子的细胞传感器，并在诸如IGFR，EGFR和其他RTK受体的下游被激活。鉴于由于PTEN缺失PI3K/AKT/mTOR信号传导的异常活化与胰腺癌，不佳进展和化疗耐药表型相关的针对该途径分子靶向方法可以鼓励。先前的研究表明，长时间使用mTOR抑制剂治疗胰腺癌细胞会触发胰岛素受体底物激活PI3K途径，从而导致继发性AKT激活和细胞周期蛋白D1表达。AKT在上皮向间充质分布的转变中也很关键，这与通过EMT相关基因的转录激活而增加的细胞运动性和侵袭有关。AKT可以直接磷酸化并刺激β-catenin进入核内，从而诱导EMT标记的转录激活。此外，活性AKT可以同时磷酸化GSK-3β，从而防止GSK-3β介导的β-连环蛋白和Snail降解。β-catenin在细胞中的利用率提高，导致细胞周期蛋白的转录并促进细胞周期机制。细胞周期蛋白D1是β-catenin/LEF信号转导的靶基因，D型哺乳动物细胞周期蛋白的过表达可稳定β-catenin刺激细胞周期。随之而来的是，细胞周期蛋白D1的上调和对Cdk4/6负控制的丧失导致细胞周期蛋白D-Cdk4/6复合物形成的过度激活并增强细胞增殖。众所周知，与EMT相关的Notch，SonicHedgehog和Wnt信号通路也可以有效调节细胞周期蛋白D1作为下游靶标。由于细胞周期蛋白D1的过度表达会导致胰腺癌的预后不良，
　　 为此目的，在胰腺癌的治疗中靶向细胞周期调节蛋白对于显着降低细胞增殖速率变得更加重要。帕博西尼（Palbociclib）是一种有效的CDK4/6抑制剂，已获得美国食品和药物管理局的批准，用于与来曲唑联合治疗晚期绝经后乳腺癌。PD‐0332991还是CDK2的高度选择性抑制剂，由于Rb的去磷酸化，它可以下调E2F转录因子的靶基因。因此，PD-0332991通过诱导细胞周期停滞在G1上，成为细胞增殖的有效抑制剂。I期临床试验正在研究PD-0332991在紫杉醇治疗转移性胰腺癌中的临床应用潜力。如最近的研究突出显示CDK4/6抑制剂作为单一药剂施用是不足以减少行进不良胰腺癌细胞，阐明不同胰腺癌细胞中PD‐0332991的分子靶点对于设计联合治疗策略具有重要意义。在本研究中，关注印度仿制药的药神网旨在研究PD‐0332991通过调节胰腺癌细胞对胰腺癌细胞增殖和侵袭性的作用。PI3K/AKT途径和EMT信号传导。
　　 在当前的研究中，关注印度仿制药的药神网证明了靶向CDK4/6是卓越的治疗策略，因为它能够通过调节Panc-1和MiaPaCa-2细胞的细胞存活率和与转移相关的信号轴来降低细胞活力。尽管每种选定浓度的PD‐0332991均可诱导细胞周期阻滞于G1期并有效降低细胞活力，但Rb表达谱显示出重要的调节作用，以评估细胞对PD‐0332991处理的敏感性。这一发现与以前对胰腺癌治疗模型的理解相似。最近的研究表明，具有较高Rb表达水平的胰腺癌细胞对PD‐0332991更加敏感，但是具有低Rb表达的细胞对PD‐0332991有抗性。在关注印度仿制药的药神网的研究中关注印度仿制药的药神网通过细胞活力测定证实了这一数据。与PD-0332991处理24小时后的Panc-1细胞相比，MiaPaCa-2细胞的存活率降低了更多。但是，PD-0332991的长期作用表明Panc-1细胞比MiaPaCa-2细胞更敏感。此外，免疫印迹结果的生物学证据证实，PD‐0332991降低了Rb表达水平，在Panc-1细胞中比在MiaPaCa-2细胞中更高。此外，PD‐0332991处理降低了Panc-1细胞中MbPa-1细胞中Rb的磷酸化程度，该磷酸化水平明显高于MiaPaCa-2细胞。与各种肿瘤模型相反，由于细胞周期蛋白D1的表达增加，胰腺癌模型对PD-0332991的反应不同。与PD-0332991处理24小时后的Panc-1细胞相比，MiaPaCa-2细胞的存活率降低了更多。但是，PD-0332991的长期作用表明Panc-1细胞比MiaPaCa-2细胞更敏感。此外，免疫印迹结果的生物学证据证实，PD‐0332991降低了Rb表达水平，在Panc-1细胞中比在MiaPaCa-2细胞中更高。此外，PD‐0332991处理降低了Panc-1细胞中MbPa-1细胞中Rb的磷酸化程度，该磷酸化水平明显高于MiaPaCa-2细胞。与各种肿瘤模型相反，由于细胞周期蛋白D1的表达增加，胰腺癌模型对PD-0332991的反应不同。与PD-0332991处理24小时后的Panc-1细胞相比，MiaPaCa-2细胞的存活率降低了更多。但是，PD-0332991的长期作用表明Panc-1细胞比MiaPaCa-2细胞更敏感。此外，免疫印迹结果的生物学证据证实，PD‐0332991降低了Rb表达水平，在Panc-1细胞中比在MiaPaCa-2细胞中更高。此外，PD‐0332991处理降低了Panc-1细胞中MbPa-1细胞中Rb的磷酸化程度，该磷酸化水平明显高于MiaPaCa-2细胞。与各种肿瘤模型相反，由于细胞周期蛋白D1的表达增加，胰腺癌模型对PD-0332991的反应不同。免疫印迹结果的生物学证据证实，PD‐0332991降低了Rb表达水平，在Panc-1细胞中比在MiaPaCa-2细胞中更高。此外，PD‐0332991处理降低了Panc-1细胞中MbPa-1细胞中Rb的磷酸化程度，该磷酸化水平明显高于MiaPaCa-2细胞。与各种肿瘤模型相反，由于细胞周期蛋白D1的表达增加，胰腺癌模型对PD-0332991的反应不同。免疫印迹结果的生物学证据证实，PD‐0332991降低了Rb表达水平，在Panc-1细胞中比在MiaPaCa-2细胞中更高。此外，PD‐0332991处理降低了Panc-1细胞中MbPa-1细胞中Rb的磷酸化程度，该磷酸化水平明显高于MiaPaCa-2细胞。与各种肿瘤模型相反，由于细胞周期蛋白D1的表达增加，胰腺癌模型对PD-0332991的反应不同。据报道27PD-0332991诱导细胞周期停滞在G1期，导致细胞周期蛋白D1积累。另一项针对Rb的表达谱不同的乳腺癌细胞研究表明，经PD-0332991处理的Rb高表达的乳腺癌细胞的细胞周期阻滞率增加，并导致细胞转移延迟。PD‐0332991抑制了乳腺癌细胞中的E2F目标基因，但胰腺癌在细胞周期调控过程中表现出不同的反应。c-Myc是E2F的目标之一，这对G1/S过渡至关重要，并且在G1期的阻滞细胞中观察到c-Myc的积累。在关注印度仿制药的药神网的研究中，关注印度仿制药的药神网观察到c-Myc在Panc-1和MiaPaCa-2细胞中高表达。根据以前的研究，c-Myc的下调是一种重要的治疗策略，因为它具有调节细胞存活信号轴的能力。此处的数据显示PD-0332991下调了c-Myc的表达水平。但是，经PD-0332991处理的MiaPaCa-2细胞仍保持c-Myc表达，即使处理后仍显示与大量菌落相对应。很好地阐明了c-Myc的转录激活促进了胰腺癌细胞的细胞增殖和锚定非依赖性集落的生长。因此，c-Myc的抑制还可能间接下调PD-0332991处理的Panc-1和MiaPaCa-2细胞中E2F靶向的基因和Rb。
　　 细胞周期调节基因与转移中包括的各种基因的表达有关。因此，靶向细胞周期调控基因可能会提高胰腺癌治疗的功效。癌细胞在浸润之前表现出间充质特征。早期对患有CDKN2A缺失和突变的胰腺癌患者的临床研究得出结论，PD‐0332991的单一疗法没有临床活性。在关注印度仿制药的药神网的研究中，使用在CDKN2A中具有纯合子缺失的Panc-1和MiaPaCa-2细胞来了解PD-0332991调控细胞增殖和转移的机制。由于细胞周期调控基因如cyclinD和cyclinE的异常活性受EMT相关转录因子调控，因此应明确研究PD‐0332991对EMT信号的影响。根据研究，可能通过PD-0332991处理的Panc-1和MiaPaCa-2细胞中与细胞存活相关的信号转导轴开发出新的治疗策略。因此，有必要研究上皮到间质转化相关基因，以了解PD-0332991对胰腺癌细胞的作用。关注印度仿制药的药神网的结果表明，3μMPD-0332991增加E-钙粘着蛋白的表达，并下调N-钙粘着蛋白。在MiaPaCa-2细胞中，波形蛋白的表达水平受PD‐0332991处理的下调，但PD‐0332991在Panc-1细胞中没有明显的作用，其表达谱较低。E-钙黏着蛋白表达的增加速率对于防止由于凋亡增加而引起的细胞增殖和转移具有重要意义。通过使E-cadherin与MiaPaCa-2胰腺癌细胞中的β-catenin结合，可以上调细胞粘附过程。一项相反的研究表明，PD-0332991通过激活COLO-357和Panc-1细胞中的转化生长因子-β信号传导和Smad转录活性来增强细胞侵袭，而在抗TGF-β的AsPC-1细胞中却没有。因此，在胰腺癌细胞的抗CDK4/6治疗期间应考虑TGF-β和Smad活性。β-连环蛋白在各种癌症类型中均被异常激活。在临床研究中，患者的胰腺肿瘤表明，增加-β-catenin蛋白的水平，细胞质和细胞核定位。在关注印度仿制药的药神网的研究中，免疫荧光分析确定了PD‐0332991降低了细胞质中Panc-1细胞中β-catenin的水平以及Panc-1细胞中的核定位。然而，PD-0332991处理对Panc-1细胞的β-catenin核蛋白水平没有影响。此外，PD‐0332991处理不能阻止免疫荧光测定法证实的MiaPaCa-2细胞中β-catenin的核定位。据报道，提供细胞接触的E-cadherin-β-catenin结合可能在肿瘤进展过程中被破坏。因此，E-cadherin和β-catenin的解离导致肿瘤中蛋白质水平的升高。β-catenin信号的抑制通过核β-catenin/TCF-1复合物的解离而抑制了胰腺肿瘤的生长。β-catenin核复合物的破坏导致靶向β-catenin的蛋白质减少。关注印度仿制药的药神网的结果显示，PD‐0332991处理降低了细胞质c-Myc水平，与抑制胰腺细胞系中的细胞增殖有关。肌动蛋白细胞骨架，α-肌动蛋白，纽蛋白与E-钙粘蛋白的胞质区域直接相关，通过稳定钙粘蛋白-连环蛋白复合物来调节细胞粘附。此外，E-钙粘着蛋白还与死亡受体DR4和DR5组成复合物，该复合物诱导细胞凋亡信号。另一项研究表明肌动蛋白与纽蛋白的结合可调节纽蛋白的活化，并包括在ECM的硬度和细胞迁移中。在当前研究中，关注印度仿制药的药神网观察到PD‐0332991治疗可增加F-肌动蛋白和纽蛋白水平。但是，PD-0332991处理后，在Panc-1细胞的边缘中，纽蛋白和F-肌动蛋白的共定位比MiaPaCa-2细胞更明显。因为粘着斑是细胞骨架与ECM连接的关键点，所以其成分的调节对于维持癌细胞的转移特性非常重要。伤口愈合试验还证实了PD‐0332991对关注印度仿制药的药神网实验细胞模型中EMT的作用。EMT受各种信号传导途径的调控。PI3K/AKT信号传导是K-Ras的下游目标，K-Ras是胰腺癌细胞中最常见的突变基因。不幸的是，仅针对K-Ras不足以治疗胰腺癌。因此，PI3K/AKT信号已被聚焦为关键的治疗靶标，以阻止细胞增殖的增加，进而触发细胞凋亡。关注印度仿制药的药神网的结果由先前的研究组成，声称Panc-1细胞表达的PI3K/AKT信号相关蛋白高于MiaPaCa-2细胞。Panc-1细胞具有耐药性，而MiaPaCa-2细胞对PI3K靶向治疗敏感。PD‐0332991处理降低了每个细胞系中的PI3K水平。尽管PD‐0332991处理不影响总AKT水平，但两种细胞系中PD‐0332991处理均降低了Ser473的p‐AKT。与Panc-1细胞相比，PD-0332991在MiaPaCa-2细胞中更有效地抑制AKT信号传导。胰腺肿瘤研究表明，通过靶向PI3K和有丝分裂原激活的蛋白激酶途径的联合疗法，可以在分子水平上克服胰腺癌的新挑战。然而，胰腺癌细胞中的各种突变和疾病的晚期诊断是抑制剂功效的主要障碍。GSK-3也是AKT和β-catenin途径的关键组成部分，在Panc-1和BxPC3中的一项胰腺癌研究表明，GSK-3β通过依赖β-catenin的机制调节了放射触发的细胞活力和增殖抑制。每个Panc-1和BxPC3的异种移植物显示GSK-3β沉默显示抗性。但是，β-catenin沉默会导致细胞死亡。在当前研究中，关注印度仿制药的药神网观察到MiaPaCa-2细胞表达的GSK-3高于Panc-1细胞。因此，PD‐0332991对GSK-3磷酸化作用相反。GSK-3β在Ser9处的磷酸化导致GSK-3失活，这是由于β-连环蛋白活性的稳定和诱导而导致的。在关注印度仿制药的药神网的结果中，由于Panc-1细胞中β-连环蛋白的表达水平，p-GSK-3β的增加似乎是对该机制的补偿。PD‐0332991与低氧抑制剂具有协同作用，可通过增加大肠癌细胞中的GSK-3来诱导细胞死亡。关注印度仿制药的药神网观察到PD-0332991有效地阻止了细胞的不依赖贴壁的生长。因此，PD‐0332991也可以通过预防球体的形成，成为治疗肺癌，乳腺癌和卵巢癌干细胞群体的成功疗法。锚固独立性与几种细胞类型的侵袭性和致瘤性密切相关。
　　 总之，PD-0332991降低了Panc-1和MiaPaCa-2细胞的细胞活力，并诱导了其在G1期的细胞周期停滞。具有较高Rb表达的Panc-1细胞对PD-0332991敏感，但是具有较低Rb表达的MiaPaCa-2细胞对PD-0332991有抗性。关注印度仿制药的药神网观察到，由于PI3K/AKT和β-catenin的各种表达，每种胰腺癌细胞系均具有提高的生存和转移能力。特别是减弱β-catenin的核定位可能至少是阻止胰腺癌细胞中EMT相关基因表达的机制之一。尽管PD‐0332991治疗有效地减少了细胞的球状体形成，但PD‐0332991的治疗功效可能会通过抑制β-catenin来提高。